1.紫外分光光度計工作原理
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(cháng)的光能量，相應地發(fā)生了分子振動(dòng)能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會(huì )相同。因此，每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線(xiàn)，可根據吸收光譜上的某些特征波長(cháng)處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。分光光度分析就是根據物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結構和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
又因為許多物質(zhì)在紫外-可見(jiàn)光區有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法對這些物質(zhì)分別進(jìn)行測定(定量分析和定性分析)。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。
朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)是光吸收的基本定律，俗稱(chēng)光吸收定律，是分光光度法定量分析的依據和基礎。當入射光波長(cháng)一定時(shí)，溶液的吸光度A是吸光物質(zhì)的濃度C及吸收介質(zhì)厚度l(吸收光程)的函數。
首先確定實(shí)驗條件，并在此條件下測得標準物質(zhì)的吸收峰以及其對應波長(cháng)值(同時(shí)可獲得該物質(zhì)的大吸收波長(cháng))；再在選定的波長(cháng)范圍內(或大波長(cháng)值處)，分別以(不同濃度)標準溶液的吸光度和溶液濃度為橫、縱坐標繪出化合物溶液的標準曲線(xiàn)得到其所對應的數學(xué)方程；接著(zhù)在相同實(shí)驗條件下配制待測溶液，測得待測溶液的吸光度，后用已獲得的標準曲線(xiàn)方程求出待測溶液中所需測定的化合物的含量。
凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結構的有機化合物，根據在特定吸收波長(cháng)處所測得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定。
2.常見(jiàn)類(lèi)型
紫外可見(jiàn)分光光度計
技術(shù)指標
波長(cháng)范圍：190-900nm
光譜帶寬：1.0
波長(cháng)準確度：±0.1nm(D2656.1nm)，±0.3nm全區域
波長(cháng)重復性：≤0.1nm
雜散光：≤0.03%T
光度準確度：±0.2%T
光度重復性：0.1%T
穩定性：0.0004A/h(500nm處)
基線(xiàn)平直度：±0.001A
數據輸出：USB接口
打印輸出：并行口
光度顯示范圍：0-200%T、-4-4A、0-9999C(0-9999F)
顯示系統：320*240位點(diǎn)陣高亮背光大屏幕LCD液晶顯示器
軟件：標配
燈源：進(jìn)口氘燈、鎢燈
接收器：進(jìn)口硅光二極管
外形尺寸：460*380*220mm
重量：20kg
儀器特點(diǎn)
1、320*240位點(diǎn)陣高質(zhì)量大屏幕液晶顯示器，顯示清晰，信息完備，充分考慮人性化設計
2、強大的數據處理功能，使實(shí)驗結果能得到充分的應用，使用戶(hù)編輯更為簡(jiǎn)單快捷
3、主要元件采用進(jìn)口配置，使精度更高、速度更快、可靠性更強、兼容性更廣、自動(dòng)化程度更高
4、豐富的應用功能，使用戶(hù)隨心所欲，應用更靈活、開(kāi)放，使分光光度計的應用領(lǐng)域得到了極大的拓展
5、高自動(dòng)化程度，使維護方便、操作簡(jiǎn)便、效率更高
大屏幕液晶LCD主機顯示功能
光度測量：選定波長(cháng)下吸光度、透過(guò)率、濃度的測試
定量測量：標準曲線(xiàn)法、系數法、單波長(cháng)法、雙波長(cháng)法、多波長(cháng)法
光譜掃描：多樣品進(jìn)行全波段掃描，找出大吸收峰值
動(dòng)力學(xué)測試：選定波長(cháng)下測試樣品濃度隨時(shí)間的變化趨勢
多波長(cháng)測試：自由選定多個(gè)波長(cháng)，自動(dòng)測出樣品在多個(gè)波長(cháng)下的吸光度和透過(guò)率值
DNA/蛋白質(zhì)測試：測試DNA/蛋白質(zhì)的濃度和比率
自動(dòng)功能：波長(cháng)誤差的自動(dòng)修復、濾光片切換的自動(dòng)定位、氘燈和鎢燈的自動(dòng)切換
其他功能：光譜導數、光譜平滑、數據導出、燈源自動(dòng)控制、支持自動(dòng)樣品池架及其它附件、配有數據口可實(shí)現聯(lián)機操作、數據存儲和調用、斷電保持和系統應用功能豐富的掃描軟件功能：光度分析、定量分析、光譜分析、動(dòng)力學(xué)分析、多波長(cháng)測試、DNA/蛋白質(zhì)測試、系統應用。
3.校正方法
紫外分光光度計的校正方法：分光光度法的重要的一個(gè)物理化學(xué)量是吸光度。為了獲得準確的研究結果，準確測得樣品溶液的吸光度是非常重要的。一般，分析結果的不可靠性與偶然誤差和系統誤差有關(guān)。偶然誤差影響測量的精密度，可通過(guò)足夠數量測量的統計處理來(lái)減少;系統誤差影響測量結果的準確度，可在大體相同實(shí)驗條件下，用比較一種物質(zhì)的準確測量結果，使系統誤差統一起來(lái)。而分光光度計的系統誤差(波長(cháng)校正、分光光度計的慢散光、放大器的線(xiàn)性響應、暗電流和比色皿的光程)和操作誤差(溫度改變、儀器讀數、操作者的改變、使用物質(zhì)的純度、稱(chēng)量和濃度、pH)對測量吸光度的影響是可以檢查和校正的。關(guān)于操作誤差，多數情況下，通過(guò)嚴格按操作程序測量、儀器調零、準確稱(chēng)量等來(lái)控制或減少這種誤差的產(chǎn)生。關(guān)于儀器的系統誤差，可通過(guò)對分光光度計的定期校正來(lái)克服，若所需準確度很高的測量，則必須天天校正。
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