數字分光光度計原理是我們從事實(shí)驗室儀器研究和應用的人員需要掌握的知識。分光光度計就是利用分光光度法對物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器。該儀器是實(shí)驗室、科研機構、醫療、農業(yè)、食品廠(chǎng)、飲用水廠(chǎng)等機構*檢驗設備。已經(jīng)成為現代分子生物實(shí)驗室常規儀器。
數字分光光度計常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長(cháng)濃度的定量。分光光度計基本原理是指采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(cháng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(cháng)的光源，光源透過(guò)測試的樣品后，部分光源被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。單色光輻射穿過(guò)被測物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長(cháng)度）成正比。
數字分光光度計詳細情況如下：
組成部分一：電光系統。在該系統中主要是由鎢燈和相應的電源組成，這種系統對整體的穩定性就有很大影響，當該系統不能正常工作后也會(huì )導致儀器工作不穩定。
組成部分二：光學(xué)系統。這種系統包括有外光路系統和單色器2個(gè)主要部分，其中外光路和單色器都有很多類(lèi)型，單色器就是紫外可見(jiàn)分光光度計散光的主要來(lái)源。
組成部分三：光電系統。該系統是紫外可見(jiàn)分光光度計zui關(guān)鍵的部件，系統會(huì )直接影響到儀器中的靈敏度和適用范圍，里面有光電倍增管、光電管、二極陣列和硅光電池等。
組成部分四：電子系統。在該系統中主要有放大器和A/D變換器等組成，其中放大器就是影響整機靈敏度和穩定性的主要相關(guān)部件。
組成部分五：輸出打印系統和數據處理系統。該系統是決定整機自動(dòng)化程度的關(guān)鍵部件，能夠直接影響紫外可見(jiàn)分光光度計的質(zhì)量。
物質(zhì)對光的選擇性吸收波長(cháng)，以及相應的吸收系數是該物質(zhì)的物理常數。當已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測定,故又稱(chēng)比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時(shí)應用標準品或對照品同時(shí)操作。
數字分光光度計原理說(shuō)明的這種方法是在280nm波長(cháng)，直接測試蛋白。選擇Warburg公式，光度計可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應的換算方法，將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質(zhì)測定過(guò)程非常簡(jiǎn)單，先測試空白液，然后直接測試蛋白質(zhì)。由于緩沖液中存在一些雜質(zhì)，一般要消除320nm的“背景”信息，設定此功能“開(kāi)”。與測試核酸類(lèi)似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，*的線(xiàn)性范圍在1.0-1.5之間。實(shí)驗中選擇Warburg公式顯示樣品濃度時(shí)，發(fā)現讀數“漂移”。這是一個(gè)正常的現象。事實(shí)上，只要觀(guān)察A280的吸光值的變化范圍不超過(guò)1%，表明結果非常穩定。漂移的原因是因為Warburg公式吸光值換算成濃度，乘以一定的系數，只要吸光值有少許改變，濃度就會(huì )被放大，從而顯得結果很不穩定。蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來(lái)說(shuō)，速度快，操作簡(jiǎn)單；但是容易受到平行物質(zhì)的干擾，如DNA的干擾；另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。
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