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數字分光光度計使用方法步驟
更新時(shí)間:2018-03-15 點(diǎn)擊次數:2155次
   數字分光光度計已經(jīng)成為現代分子生物實(shí)驗室常規儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長(cháng)濃度的定量。儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統組成。
  數字分光光度計原理
  數字分光光度計采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(cháng)的光源,通過(guò)系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長(cháng)的光源,光線(xiàn)透過(guò)測試的樣品后,部分光線(xiàn)被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
  單色光輻射穿過(guò)被測物質(zhì)溶液時(shí),被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長(cháng)度)成正比,其關(guān)系為:A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc  式中:A 為吸光度;I。為入射的單色光強度;I 為透射的單色光強度;T 為物質(zhì)的透射率;k 為摩爾吸收系數;L 為被分析物質(zhì)的光程,即比色皿的邊長(cháng);c為物質(zhì)的濃度;
  物質(zhì)對光的選擇性吸收波長(cháng),以及相應的吸收系數是該物質(zhì)的物理常數。當已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區,除某些物質(zhì)對光有吸收外,很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測定,故又稱(chēng)比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時(shí)應用標準品或對照品同時(shí)操作。
  數字分光光度計使用方法步驟
  1)預熱儀器。為使測定穩定,將電源開(kāi)關(guān)打開(kāi),使儀器預熱20min,為了防止光電管疲勞,不要連續光照。預熱儀器時(shí)和在不測定時(shí)應將比色皿暗箱蓋打開(kāi),使光路切斷。
  2)選定波長(cháng)。根據要求,轉動(dòng)波長(cháng)調節器,使指針指示所需要的單色光波長(cháng)。
  3)固定靈敏度檔。根據有色溶液對光的吸收情況,為使吸光度讀數為0.2-0.7,選擇合適的靈敏度。為此,旋動(dòng)靈敏度檔,使其固定于某一檔,在實(shí)驗過(guò)程中不再變動(dòng)。一般測量固定在“1”檔。
  4)調節“0”點(diǎn)。輕輕旋動(dòng)調“0”電位器,使讀數表頭指針恰好位于透光度為“0”處(此時(shí),比色皿暗箱蓋是打開(kāi)的,光路被切斷,光電管不受光照)。
  5)調節T=。將盛蒸餾水(或空白溶液或純溶劑)的比色皿放入比色皿座架中的*格內,有色溶液放在其它格內,把比色皿暗箱蓋子輕輕蓋上,轉動(dòng)光量調節器,使透光度T=,即表頭指針恰好指在T=處。
  6)測定。輕輕拉動(dòng)比色皿座架拉桿,使有色溶液進(jìn)入光路,此時(shí)表頭指針所示為該有色溶液的吸光度A。讀數后,打開(kāi)比色皿暗箱蓋。
  7)關(guān)機。實(shí)驗完畢,切斷電源,數字分光光度計將比色皿取出洗凈,并將比色皿座架及暗箱用軟紙擦凈。
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