微量紫外可見(jiàn)分光光度計是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見(jiàn)輻射光后,發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構,其吸收光能量的情況也就不會(huì )相同,因此,每種物質(zhì)就有其*的、固定的吸收光譜曲線(xiàn),可根據吸收光譜上的某些特征波長(cháng)處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎。
分光光度分析就是根據物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結構和物質(zhì)間相互作用的有效手段。根據Lambert-Beer定律說(shuō)明光的吸收與吸收層厚度成正比,比耳定律說(shuō)明光的吸收與溶液濃度成正比;如果同時(shí)考慮吸收層厚度和溶液濃度對光吸收率的影響,即得朗伯一比耳定律。即A=sbc,(A為吸光度,s為摩爾吸光系數,b為液池厚度,c為溶液濃度)就可以對溶液進(jìn)行定量分析。將分析樣品和標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中,在同一條件下分別測定紫外可見(jiàn)吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì),則兩者的光譜圖應*一致。如果沒(méi)有標樣,也可以和現成的標準譜圖對照進(jìn)行比較。這種方法要求儀器準確,精密度高,且測定條件要相同。
微量紫外可見(jiàn)分光光度計主要由光源系統、單色器系統、樣品室、檢測系統組成:
光源:發(fā)出所需波長(cháng)范圍內的連續光譜,有足夠的光強度,穩定??梢?jiàn)光區:鎢燈,碘鎢燈(320~2500nm)紫外區:氫燈,氘燈(180~375nm);氙燈:紫外、可見(jiàn)光區均可用作光源。
單色器:將光源發(fā)出的連續光譜分解為單色光的裝置。
棱鏡:依據不同波長(cháng)光通過(guò)棱鏡時(shí)折射率不同。
光柵:在鍍鋁的玻璃表面刻有數量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)。利用光通過(guò)光柵時(shí)發(fā)生衍射和干涉現象而分光。
吸收池:用于盛待測及參比溶液??梢?jiàn)光區:光學(xué)玻璃池;紫外區:石英池。
檢測器:利用光電效應,將光能轉換成電流訊號。光電池,光電管,光電倍增管。
檢流計(指示器):刻度顯示或數字顯示、自動(dòng)掃描記錄。