實(shí)驗室分光光度計是實(shí)驗室檢測核酸或者蛋白樣品濃度常用的工具之一。儀器使用頻繁,但甚少見(jiàn)到有人維護。其實(shí),保持分光光度計清潔、無(wú)污染是成功操作的關(guān)鍵。適合從紫外光區到可見(jiàn)光區的測定,支持單機、聯(lián)機2種模式,單機狀態(tài)下使用機內微機系統提供熒光強度測量、濃度直讀、自動(dòng)調零、自動(dòng)扣除背景等功能,聯(lián)機狀態(tài)可通過(guò)USB2.0接口使用上層軟件對儀器進(jìn)行控制和數據采集分析。
實(shí)驗室分光光度計測量條件的選擇:
測試波長(cháng)的選擇
當用分光光度計對溶液進(jìn)行測定時(shí),首先需要選擇合適的測量波長(cháng)。選擇的依據是該被測溶液的吸收曲線(xiàn)。在一般情況下,總是選擇較大吸收波長(cháng)作為測量波長(cháng),這樣可以提高靈敏度。
而在有些情況下較大吸收峰很尖銳、吸收過(guò)大或附近有干擾存在,就不能選較大吸收波長(cháng),而須在保證有一定靈敏度的情況下,選擇吸收曲線(xiàn)中的其它波長(cháng)進(jìn)行測定(曲線(xiàn)較平坦處對應的波長(cháng)),以消除干擾。繪制吸收曲線(xiàn)是正確選擇波長(cháng)的有效手段和方法。
參比溶液和溶荊的選擇
分光光度計的測量實(shí)際上是以通過(guò)參比池的光強度作為人射光強度來(lái)測定試樣的吸光度,先調節儀器使透過(guò)參比池溶液的吸光度為零,然后讓同一束光通過(guò)樣品,使得吸光度比較真實(shí)地反映待測物質(zhì)的濃度,所以參比溶液的選擇非常重要。
如果僅有待測物質(zhì)與顯色劑的反應產(chǎn)物有吸收,可用純溶劑或蒸餾水作參比溶液。如果顯色劑有顏色,并在測定波長(cháng)下有吸收,則用顯色劑溶液作參比溶液,所加人顯色劑及其它試劑的量,與試樣中的加入量應一致。
如果樣品中其它組分本身的顏色對測定有干擾,而所用顯色劑沒(méi)顏色,則用不加顯色劑的樣品溶液作參比液。
正確選擇合適的溶劑,對提高分析的準確度起重要作用。為減小溶劑中雜質(zhì)的影響,應選擇高純度的溶劑;溶劑應不與待測物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應;待測物在溶劑中要有一定的溶解度;在測定的波長(cháng)范圍內,溶劑本身沒(méi)有吸收,注意常用溶劑的較短可用波長(cháng);當用揮發(fā)性大的溶劑時(shí),測量過(guò)程中吸收池應加蓋。