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共創(chuàng )共贏(yíng)
分光光度計已經(jīng)成為現代分子生物實(shí)驗室常規儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長(cháng)濃度的定量。
分光光度計采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(cháng)的光源,通過(guò)系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長(cháng)的光源,光源透過(guò)測試的樣品后,部分光源被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
核酸的定量
核酸的定量是分光光度計使用頻率zui高的功能??梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的zui高吸收峰的吸收波長(cháng)260nm。每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同。定量不同類(lèi)型的核酸,事先要選擇對應的系數。如:1OD的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度。測試前,選擇正確的程序,輸入原液和稀釋液的體積,爾后測試空白液和樣品液。然而,實(shí)驗并非一帆風(fēng)順。讀數不穩定可能是實(shí)驗者zui頭痛的問(wèn)題。靈敏度越高的儀器,表現出的吸光值漂移越大。
分光光度計使用事項說(shuō)明:
1.分光光度計應放在干燥的房間內,使用時(shí)放置在堅固平穩的工作臺上,室內照明不宜太強。熱天時(shí)不能用電扇直接向分光光度計吹風(fēng),防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩定。
2.使用分光光度計前,使用者應該首先了解分光光度計的結構和工作原理,以及各個(gè)操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前,應該對分光光度計的安全性能進(jìn)行檢查,電源接線(xiàn)應牢固,通電也要良好,各個(gè)調節旋鈕的起始位置應該正確,然后再按通電源開(kāi)關(guān)。
3.在分光光度計尚未接通電源時(shí),電表指針必須于“0”刻線(xiàn)上,若不是這種情況,則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調節。
分光光度計的重要配件—— 比色杯
比色杯按照材質(zhì)大致分為石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根據不同的測量體積,有比色杯和毛細比色杯等。一般測試核酸和紫外定量蛋白,均采用石英杯或者玻璃杯,但是不適合比色法測定。因為反應中的染料(如考馬斯亮蘭)能讓石英和玻璃著(zhù)色,所以必須采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不適合用于在紫外范圍內測試樣品。
由于另外測試的樣品量不同,所以一般分光光度計廠(chǎng)家提供不同容積的比色杯以滿(mǎn)足用戶(hù)不同的需求。目前市場(chǎng)已經(jīng)存在一種既可用于核酸、紫外蛋白質(zhì)定量,亦可用于蛋白比色法測定的塑料杯,樣品用量?jì)H需50μl,比色杯單個(gè)無(wú)菌包裝,可以回收樣品。如EppendorfUVette®塑料比色杯,是目前比色杯市場(chǎng)上一個(gè)革新。隨著(zhù)生命科學(xué)以及相關(guān)學(xué)科發(fā)展,對此類(lèi)科學(xué)的實(shí)驗研究提出更高的要求,分光光度計將是分子生物學(xué)實(shí)驗室*的儀器,也成為微生物、食品、制藥等相關(guān)實(shí)驗室的*設備之一。
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