分子的紫外可見(jiàn)吸收光譜是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見(jiàn)輻射光后,發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。它是帶狀光譜,反映了分子中某些基團的信息??梢杂脴藴使庾V圖再結合其它手段進(jìn)行定性分析。
根據Lambert-Beer定律:A=εbc,(A為吸光度,ε為摩爾吸光系數b為液池厚度,c為溶液濃度)可以對溶液進(jìn)行定量分析。
你可以用uv紫外可見(jiàn)分光光度計測定定三種農藥的波長(cháng)在某溶液中的zui大、zui小吸收波長(cháng)。
配制溶液-在光譜檢測項下進(jìn)行-調整檢測光譜范圍及速度--掃描光譜圖--吸光度zui大處對應波長(cháng)為zui大吸收波長(cháng),吸光度zui小處對應的波長(cháng)為zui小吸收波長(cháng)。
1.光源燈;2.濾光片;3.球面反射鏡;4.入射狹縫;5.保護玻璃;6.平面反射鏡;7.準直鏡;8.光柵;9.保護玻璃;10.出射狹縫; 11.聚光鏡;12.試樣室; 13.光門(mén);14.光電管.
分光光度計工作原理:
由光源燈(1)發(fā)出連續輻射光線(xiàn),經(jīng)濾光片(2)和球面反射鏡(3)至單色器的入射狹縫(4)聚焦成像,光束通過(guò)入射狹縫(5)經(jīng)平面反射鏡(6)到準直鏡(7)產(chǎn)生平行光,射至光柵(8)上色散后又以準直鏡(7)聚焦在出射狹縫(10)上形成一連續光譜,由出射狹縫選擇射出一定波長(cháng)的單色光,經(jīng)聚光鏡(11)聚光后,通過(guò)試樣室(12)中的測試溶液部分吸收后,光經(jīng)光門(mén)(13)再照射到光電管(14)上.調整儀器,使透光度為,再移動(dòng)試樣架拉手,使同一單色光通過(guò)測試溶液后照射到光電管上.如果被測樣品有光吸收現象,光量減弱放大器處理,將光能的變化程度通過(guò)數字顯示器顯示出來(lái).可根據需要直接在數字顯示器上讀取透光度(T),吸光度(A)或濃度(C).
uv紫外可見(jiàn)分光光度計基本操作:
(1)通電---儀器自檢----預熱20min;
(2)用鍵設置測試方式:透射比(T),吸光度(A),已知標樣濃度方式(C)和已知標樣濃度斜率(K)方式;
(3)波長(cháng)選擇:用波長(cháng)調節旋鈕設置所需的單色光波長(cháng);
(4)放樣順序:打開(kāi)樣品室蓋,在1~4號放置比色皿槽中,依次放入%T校具(黑體),參比液,樣品液1和樣品液2.
(5)校具(黑體)校"0.000":將%T校具(黑體)置入光路,在T方式下按"%T"鍵,此時(shí)儀器自動(dòng)校正后顯示"0.000"
(6)參比液校"100"%T或"0.000"A:將參比液拉入光路中,按"0A/T"鍵調0A/T,此時(shí)儀器顯示"BLA",表示儀器正在自動(dòng)校正,校正完畢后顯示"100"%T或"0.000"A后,表示校正完畢,可以進(jìn)行樣品測定.
(7)樣品測定:將兩樣品液分別拉入光路中,此時(shí)若在"T"方式下則可依次顯示樣品的透射比(透光度)若在"A"方式下,則顯示測得的樣品吸光度.
uv紫外可見(jiàn)分光光度計的使用注意事項
(1) 預熱是保證儀器準確穩定的重要步驟。
(2) 比色皿的清潔程度,直接影響實(shí)驗結果.因此,特別要將比色皿清洗干凈.先用自來(lái)水將用過(guò)的比色皿反復沖洗,然后用蒸餾水淋洗,倒立于濾紙片上,待干后再收回比色皿盒中.必要時(shí),還要對比色皿進(jìn)行更精細的處理,如用濃硝酸或鉻酸洗液浸泡,沖洗。
(3) 比色皿與分光光度計應配套使用,否則會(huì )引起較大的實(shí)驗誤差. 比色皿不能單個(gè)調換 1.3 7200型光柵分光光度計的使用注意事項。
(4) 比色皿內盛液應為其容量的2/3,過(guò)少會(huì )影響實(shí)驗結果,過(guò)多易在測量過(guò)程中外溢,污染儀器. 比色皿中試樣裝入量應為2/3~3/4之間。
(5) 拿放比色皿時(shí),應持其"毛面",杜絕接觸光路通過(guò)的"光面".如比色皿外表面有液體,應用綢布拭干,以保證光路通過(guò)時(shí)不受影響。
(6) 若待測液濃度過(guò)大,應選用短光徑的比色皿,一般應使吸光度讀數處于0.1~0.8范圍內為宜.由于測定空白,標準和待測溶液時(shí)使用同樣光徑的比色皿,故不必考慮因光徑變化而引起的影響。